Team:USP-EEL-Brazil/Biochemical Characterization
Laccase from Thielavia terrestris
A lacase do Thielavia terrestris (XP_003656170.1) foi cedida pelo Evandro José Mulinari, aluno de doutorado e pesquisador do Instituto de Física de São Carlos da Universidade de São Paulo (IFSC/USP). O gene está inserido no vetor pETTrx-1a / LIC e transformado em E. coli Rosetta Gami 2 (DE3).
O gene foi desenhado de tal forma que, ao ser expressa, a proteína contenha peptídeos com sítios de clivagem para TEV seguido de tiorredoxina e 6 histidinas na extremidade N-terminal, para facilitar a purificação dessas proteínas. O vetor também contém genes para resistências ao antibiótico kanamicina e ainda a expressão é regulada pelo operon Lac.
Recebemos uma placa de Petri com meio LB com ágar contendo as células transformantes. Foi feito estoque glicerinado com glicerol 50%. Foi feito propagação a partir das colônias da placa para produção e purificação do plasmídeo por Miniprep.