Notebook
-
13 April: We attempted making competant E. coli DH5alpha cells. We got the strain from Guhan sir's lab
16 April: We tried checking its competancy by RFP transformation but not so good results.
20 April: We again tried making Competant cells but we did not liquid nitrogen for flash freeze step. we use SOC media instead of LB this time.
22 April: We tried transformation but it fails in some plates. Much fewer colonies.
26 April: We meet Guhan sir and Anantha barathi ma'am for guidance and help. Also, try to understand feasibility of the project.
8-10 May: We do and extensive literature survey for this project and Acinetobacter baylyi ADP1 seems to be good candidates.
14 May: We finalise to work on lignin conversion to biofuels using Acinetobacter baylyi ADP1. We choose this organisms over other because, it is non pathogenic and has amazing capabilities of degrading aromatic compounds like caffeate, vaillate, etc. Above all, it is naturally competent and Guhan sir's lab have expertise in working with this organism.
15 May: We finalize to work on lignin conversion to biofuels using Acinetobacter baylyi ADP1. We choose this organisms over other because, it is non pathogenic and has amazing capabilities of degrading aromatic compounds like caffeate, vaillate, etc. Above all, it is naturally competant and Guhan sir's lab have expertise in working with this organism.
16 May: Acinetobacter baylyi has 6 copies of transposonal elemets which were remove in 2017 and a new strain of this organism was engineered called ADP-!Sx (Suárez GA, Renda BA, Dasgupta A, Barrick JE. Reduced Mutation Rate and Increased Transformability of Transposon-Free Acinetobacter baylyi ADP1-ISx. Kivisaar M, ed. Applied and Environmental Microbiology. 2017;83(17):e01025-17. doi:10.1128/AEM.01025-17.) We request barrick to send us the engineered strain.
18 May: We plan to compile all literature and decide for direction of the project. Vanillin production seems to be potential candidate but experiments fail.
22 May: We realise that we need a proper toolkit and well established methods to work with A. baylyi. So we plan our project to take it into direction of Expanding the toolbox of A. baylyi ADP1.
23 May: We finalise upon the things we want to try out: Codon optimized Reporters and promoter. If time permits then terminator. 25 May: Anantha ma'am asks sagar to place order of CO GFP and mCherry for now to GenScript Meanwhile we do a lit survey for various approahes for promoter design.
29 May: GenScript gets back to us with a reply that there is no reliable codon usage table available. They send us link of kasuza website which has a codon table based on 2 coding regions.
30 May: We knew that coding region annotation was present on NCBI website. we discussed this problem with KD and idea of CUTE was born.
31 May: Workplan was made to start working on Promoter Design, Codon usage table on A. baylyi and Codon optimization. We fixed upon using pBAV1K vector as it is known to work in A. baylyi and sagar had preliminary results for it KD, burhan sathvik were assigned on Codon table of A. baylyi
Richa, Burhan, Sathvik get on Promoter design.
Lorem ipsum dolor sit amet, consectetur adipiscing elit, sed do eiusmod tempor incididunt ut labore et dolore magna aliqua. Duis tristique sollicitudin nibh sit. At in tellus integer feugiat scelerisque varius morbi. Lacus vel facilisis volutpat est velit egestas. Vitae et leo duis ut diam. Elit eget gravida cum sociis natoque penatibus et. Quisque non tellus orci ac auctor augue mauris. Sit amet porttitor eget dolor morbi non arcu risus quis. Vel turpis nunc eget lorem dolor sed. Convallis aenean et tortor at risus. In nisl nisi scelerisque eu ultrices. Aliquam eleifend mi in nulla. Vitae suscipit tellus mauris a diam. Euismod quis viverra nibh cras pulvinar mattis nunc sed blandit. Habitasse platea dictumst vestibulum rhoncus est pellentesque. Suspendisse faucibus interdum posuere lorem ipsum dolor sit. Vitae suscipit tellus mauris a. Suspendisse ultrices gravida dictum fusce ut placerat orci.
Lorem ipsum dolor sit amet, consectetur adipiscing elit, sed do eiusmod tempor incididunt ut labore et dolore magna aliqua. Duis tristique sollicitudin nibh sit. At in tellus integer feugiat scelerisque varius morbi. Lacus vel facilisis volutpat est velit egestas. Vitae et leo duis ut diam. Elit eget gravida cum sociis natoque penatibus et. Quisque non tellus orci ac auctor augue mauris. Sit amet porttitor eget dolor morbi non arcu risus quis. Vel turpis nunc eget lorem dolor sed. Convallis aenean et tortor at risus. In nisl nisi scelerisque eu ultrices. Aliquam eleifend mi in nulla. Vitae suscipit tellus mauris a diam. Euismod quis viverra nibh cras pulvinar mattis nunc sed blandit. Habitasse platea dictumst vestibulum rhoncus est pellentesque. Suspendisse faucibus interdum posuere lorem ipsum dolor sit. Vitae suscipit tellus mauris a. Suspendisse ultrices gravida dictum fusce ut placerat orci.
Lorem ipsum dolor sit amet, consectetur adipiscing elit, sed do eiusmod tempor incididunt ut labore et dolore magna aliqua. Duis tristique sollicitudin nibh sit. At in tellus integer feugiat scelerisque varius morbi. Lacus vel facilisis volutpat est velit egestas. Vitae et leo duis ut diam. Elit eget gravida cum sociis natoque penatibus et. Quisque non tellus orci ac auctor augue mauris. Sit amet porttitor eget dolor morbi non arcu risus quis. Vel turpis nunc eget lorem dolor sed. Convallis aenean et tortor at risus. In nisl nisi scelerisque eu ultrices. Aliquam eleifend mi in nulla. Vitae suscipit tellus mauris a diam. Euismod quis viverra nibh cras pulvinar mattis nunc sed blandit. Habitasse platea dictumst vestibulum rhoncus est pellentesque. Suspendisse faucibus interdum posuere lorem ipsum dolor sit. Vitae suscipit tellus mauris a. Suspendisse ultrices gravida dictum fusce ut placerat orci.
Lorem ipsum dolor sit amet, consectetur adipiscing elit, sed do eiusmod tempor incididunt ut labore et dolore magna aliqua. Duis tristique sollicitudin nibh sit. At in tellus integer feugiat scelerisque varius morbi. Lacus vel facilisis volutpat est velit egestas. Vitae et leo duis ut diam. Elit eget gravida cum sociis natoque penatibus et. Quisque non tellus orci ac auctor augue mauris. Sit amet porttitor eget dolor morbi non arcu risus quis. Vel turpis nunc eget lorem dolor sed. Convallis aenean et tortor at risus. In nisl nisi scelerisque eu ultrices. Aliquam eleifend mi in nulla. Vitae suscipit tellus mauris a diam. Euismod quis viverra nibh cras pulvinar mattis nunc sed blandit. Habitasse platea dictumst vestibulum rhoncus est pellentesque. Suspendisse faucibus interdum posuere lorem ipsum dolor sit. Vitae suscipit tellus mauris a. Suspendisse ultrices gravida dictum fusce ut placerat orci.
Lorem ipsum dolor sit amet, consectetur adipiscing elit, sed do eiusmod tempor incididunt ut labore et dolore magna aliqua. Duis tristique sollicitudin nibh sit. At in tellus integer feugiat scelerisque varius morbi. Lacus vel facilisis volutpat est velit egestas. Vitae et leo duis ut diam. Elit eget gravida cum sociis natoque penatibus et. Quisque non tellus orci ac auctor augue mauris. Sit amet porttitor eget dolor morbi non arcu risus quis. Vel turpis nunc eget lorem dolor sed. Convallis aenean et tortor at risus. In nisl nisi scelerisque eu ultrices. Aliquam eleifend mi in nulla. Vitae suscipit tellus mauris a diam. Euismod quis viverra nibh cras pulvinar mattis nunc sed blandit. Habitasse platea dictumst vestibulum rhoncus est pellentesque. Suspendisse faucibus interdum posuere lorem ipsum dolor sit. Vitae suscipit tellus mauris a. Suspendisse ultrices gravida dictum fusce ut placerat orci.
Lorem ipsum dolor sit amet, consectetur adipiscing elit, sed do eiusmod tempor incididunt ut labore et dolore magna aliqua. Duis tristique sollicitudin nibh sit. At in tellus integer feugiat scelerisque varius morbi. Lacus vel facilisis volutpat est velit egestas. Vitae et leo duis ut diam. Elit eget gravida cum sociis natoque penatibus et. Quisque non tellus orci ac auctor augue mauris. Sit amet porttitor eget dolor morbi non arcu risus quis. Vel turpis nunc eget lorem dolor sed. Convallis aenean et tortor at risus. In nisl nisi scelerisque eu ultrices. Aliquam eleifend mi in nulla. Vitae suscipit tellus mauris a diam. Euismod quis viverra nibh cras pulvinar mattis nunc sed blandit. Habitasse platea dictumst vestibulum rhoncus est pellentesque. Suspendisse faucibus interdum posuere lorem ipsum dolor sit. Vitae suscipit tellus mauris a. Suspendisse ultrices gravida dictum fusce ut placerat orci.
Lorem ipsum dolor sit amet, consectetur adipiscing elit, sed do eiusmod tempor incididunt ut labore et dolore magna aliqua. Duis tristique sollicitudin nibh sit. At in tellus integer feugiat scelerisque varius morbi. Lacus vel facilisis volutpat est velit egestas. Vitae et leo duis ut diam. Elit eget gravida cum sociis natoque penatibus et. Quisque non tellus orci ac auctor augue mauris. Sit amet porttitor eget dolor morbi non arcu risus quis. Vel turpis nunc eget lorem dolor sed. Convallis aenean et tortor at risus. In nisl nisi scelerisque eu ultrices. Aliquam eleifend mi in nulla. Vitae suscipit tellus mauris a diam. Euismod quis viverra nibh cras pulvinar mattis nunc sed blandit. Habitasse platea dictumst vestibulum rhoncus est pellentesque. Suspendisse faucibus interdum posuere lorem ipsum dolor sit. Vitae suscipit tellus mauris a. Suspendisse ultrices gravida dictum fusce ut placerat orci.
Lorem ipsum dolor sit amet, consectetur adipiscing elit, sed do eiusmod tempor incididunt ut labore et dolore magna aliqua. Duis tristique sollicitudin nibh sit. At in tellus integer feugiat scelerisque varius morbi. Lacus vel facilisis volutpat est velit egestas. Vitae et leo duis ut diam. Elit eget gravida cum sociis natoque penatibus et. Quisque non tellus orci ac auctor augue mauris. Sit amet porttitor eget dolor morbi non arcu risus quis. Vel turpis nunc eget lorem dolor sed. Convallis aenean et tortor at risus. In nisl nisi scelerisque eu ultrices. Aliquam eleifend mi in nulla. Vitae suscipit tellus mauris a diam. Euismod quis viverra nibh cras pulvinar mattis nunc sed blandit. Habitasse platea dictumst vestibulum rhoncus est pellentesque. Suspendisse faucibus interdum posuere lorem ipsum dolor sit. Vitae suscipit tellus mauris a. Suspendisse ultrices gravida dictum fusce ut placerat orci.
Lorem ipsum dolor sit amet, consectetur adipiscing elit, sed do eiusmod tempor incididunt ut labore et dolore magna aliqua. Duis tristique sollicitudin nibh sit. At in tellus integer feugiat scelerisque varius morbi. Lacus vel facilisis volutpat est velit egestas. Vitae et leo duis ut diam. Elit eget gravida cum sociis natoque penatibus et. Quisque non tellus orci ac auctor augue mauris. Sit amet porttitor eget dolor morbi non arcu risus quis. Vel turpis nunc eget lorem dolor sed. Convallis aenean et tortor at risus. In nisl nisi scelerisque eu ultrices. Aliquam eleifend mi in nulla. Vitae suscipit tellus mauris a diam. Euismod quis viverra nibh cras pulvinar mattis nunc sed blandit. Habitasse platea dictumst vestibulum rhoncus est pellentesque. Suspendisse faucibus interdum posuere lorem ipsum dolor sit. Vitae suscipit tellus mauris a. Suspendisse ultrices gravida dictum fusce ut placerat orci.
Lorem ipsum dolor sit amet, consectetur adipiscing elit, sed do eiusmod tempor incididunt ut labore et dolore magna aliqua. Duis tristique sollicitudin nibh sit. At in tellus integer feugiat scelerisque varius morbi. Lacus vel facilisis volutpat est velit egestas. Vitae et leo duis ut diam. Elit eget gravida cum sociis natoque penatibus et. Quisque non tellus orci ac auctor augue mauris. Sit amet porttitor eget dolor morbi non arcu risus quis. Vel turpis nunc eget lorem dolor sed. Convallis aenean et tortor at risus. In nisl nisi scelerisque eu ultrices. Aliquam eleifend mi in nulla. Vitae suscipit tellus mauris a diam. Euismod quis viverra nibh cras pulvinar mattis nunc sed blandit. Habitasse platea dictumst vestibulum rhoncus est pellentesque. Suspendisse faucibus interdum posuere lorem ipsum dolor sit. Vitae suscipit tellus mauris a. Suspendisse ultrices gravida dictum fusce ut placerat orci.
Lorem ipsum dolor sit amet, consectetur adipiscing elit, sed do eiusmod tempor incididunt ut labore et dolore magna aliqua. Duis tristique sollicitudin nibh sit. At in tellus integer feugiat scelerisque varius morbi. Lacus vel facilisis volutpat est velit egestas. Vitae et leo duis ut diam. Elit eget gravida cum sociis natoque penatibus et. Quisque non tellus orci ac auctor augue mauris. Sit amet porttitor eget dolor morbi non arcu risus quis. Vel turpis nunc eget lorem dolor sed. Convallis aenean et tortor at risus. In nisl nisi scelerisque eu ultrices. Aliquam eleifend mi in nulla. Vitae suscipit tellus mauris a diam. Euismod quis viverra nibh cras pulvinar mattis nunc sed blandit. Habitasse platea dictumst vestibulum rhoncus est pellentesque. Suspendisse faucibus interdum posuere lorem ipsum dolor sit. Vitae suscipit tellus mauris a. Suspendisse ultrices gravida dictum fusce ut placerat orci.
Lorem ipsum dolor sit amet, consectetur adipiscing elit, sed do eiusmod tempor incididunt ut labore et dolore magna aliqua. Duis tristique sollicitudin nibh sit. At in tellus integer feugiat scelerisque varius morbi. Lacus vel facilisis volutpat est velit egestas. Vitae et leo duis ut diam. Elit eget gravida cum sociis natoque penatibus et. Quisque non tellus orci ac auctor augue mauris. Sit amet porttitor eget dolor morbi non arcu risus quis. Vel turpis nunc eget lorem dolor sed. Convallis aenean et tortor at risus. In nisl nisi scelerisque eu ultrices. Aliquam eleifend mi in nulla. Vitae suscipit tellus mauris a diam. Euismod quis viverra nibh cras pulvinar mattis nunc sed blandit. Habitasse platea dictumst vestibulum rhoncus est pellentesque. Suspendisse faucibus interdum posuere lorem ipsum dolor sit. Vitae suscipit tellus mauris a. Suspendisse ultrices gravida dictum fusce ut placerat orci.